Hareketli faz kanın sıvı fazına eşdeğerdirve kullanım esnasında dikkat edilmesi gereken çeşitli hususlar bulunmaktadır. Bunların arasında dikkat edilmesi gereken bazı “tuzaklar” var.
01. Organik çözücüyü ekledikten sonra mobil fazın pH'ını ölçün
PH'ı organik bir katkı maddesiyle ölçerseniz elde edeceğiniz pH, organik solventi eklemeden öncekinden farklı olacaktır. Ancak en önemli şey tutarlı olmaktır. PH'ı her zaman organik çözücüyü ekledikten sonra ölçüyorsanız, kullandığınız yöntemdeki adımlarınızı belirttiğinizden emin olun, böylece diğerleri de aynı yöntemi uygulayacaktır. Bu yöntem %100 doğru olmasa da en azından yöntemin tutarlı olmasını sağlayacaktır. Bu, doğru bir pH değeri elde etmekten daha önemli olabilir.
02. Tampon kullanılmadı
Tamponun amacı pH'ı kontrol etmek ve değişmesini önlemektir. Diğer birçok yöntem, mobil fazın pH'ını değiştirerek alıkonma süresinde, tepe şeklinde ve tepe yanıtında değişikliklere neden olabilir.
Formik asit, TFA vb. tampon değildir
03. Tamponun normal pH aralığında kullanılmaması
Her bir tampon, en iyi pH stabilitesini sağladığı 2 pH birim aralık genişliğine sahiptir. Bu pencerenin dışındaki tamponlar pH değişikliklerine karşı etkili direnç sağlamayacaktır. Ya doğru aralıkta bir tampon kullanın ya da ihtiyacınız olan pH aralığını kapsayan bir tampon seçin.
04. Organik çözeltiye tampon ekleyin
Bir tampon çözeltisini bir organik fazla karıştırmak büyük olasılıkla tamponun çökelmesine neden olacaktır. Çoğu durumda yağış meydana gelse bile tespit edilmesi hala zordur. Her zaman organik çözeltiyi sulu faza eklemeyi unutmayın; bu, tampon çökelmesi olasılığını büyük ölçüde azaltabilir.
05. Konsantrasyon gradyanını %0'dan bir pompayla karıştırın
Günümüzde mevcut olan pompalar, mobil fazları etkili bir şekilde karıştırabilir ve hat içi gazdan arındırabilir, ancak sizin yönteminizi kullanan herkes yüksek kaliteli bir pompaya sahip olmayacaktır. A ve B'yi tek bir çözümde karıştırın ve %100 satır içi çalıştırın.
Örneğin 950 ml organik başlangıç karışımı 50 ml su ile karıştırılarak hazırlanabilir. Bunun avantajı, HPLC'ler arasındaki değişkenliği azaltabilmesi ve sistemdeki kabarcık ve çökelme olasılığını azaltabilmesidir. Pompa karışımının oranının 95:5 olduğunu belirtmekte fayda var; bu, önceden karıştırılmış karışımın şişede tutulma süresinin de 95:5 olduğu anlamına gelmez.
06. Tamponu değiştirmek için doğru modifiye asit (baz) kullanılmaması
Yalnızca kullandığınız tampon tuzunu oluşturan asit veya bazı kullanın. Örneğin bir sodyum fosfat tamponu yalnızca fosforik asit veya sodyum hidroksit ile hazırlanmalıdır.
07. Yöntemde tamponla ilgili tüm bilgilerin belirtilmemesi, örneğin 5g tampon eklenmesi1000 ml suya sodyum fosfat.
Tampon tipi, tamponlanabilecek pH aralığını belirler. Gerekli konsantrasyon tampon gücünü belirler. 5 gram veya susuz sodyum fosfat ve 5 gram monosodyum fosfat monohidrat, farklı tampon kuvvetlerine sahiptir.
08. Kontrol etmeden önce organik solventlerin eklenmesi
Önceki yöntemde taban çizgisi B için bir tampon çözelti kullanıldıysa ve yönteminizde taban çizgisi B için organik bir çözelti kullanılıyorsa, tamponu pompa hortumuna ve pompa kafasına yerleştirebileceğinizi umarız.
09. Şişeyi kaldırın ve son damlayı boşaltın
Tüm çalışmayı tamamlamak için yeterli mobil faza sahip olmamanız ve numunenizin duman çıkarması ihtimali yüksektir. Pompa sisteminin ve kolonun yanma ihtimalinin yanı sıra mobil faz tamamen buharlaşacak ve şişenin tepesindeki mobil faz değişecektir.
10. Ultrasonik gaz giderme mobil fazını kullanın
En önemli nokta, tüm tampon tuzlarının çözündüğünden emin olmaktır, ancak bu, gazdan arındırmanın en kötü yoludur ve mobil fazın hızla ısınmasına ve organik bileşenlerin buharlaşmasına neden olur. Daha sonra gereksiz sorunlardan kaçınmak için mobil fazınızı vakumla filtrelemek için beş dakikanızı ayırın.
Gönderim zamanı: Ağu-27-2024